معلومة

12.2: المقايسات المناعية للأمراض - علم الأحياء

12.2: المقايسات المناعية للأمراض - علم الأحياء



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

12.2: المقايسات المناعية للأمراض

تقنيات المقايسة المناعية المعتمدة على نثر رامان المُحسَّنة السطح للكشف عن المؤشرات الحيوية للأمراض

يعد اكتشاف المؤشرات الحيوية ذا أهمية حيوية في اكتشاف الأمراض وإدارتها ورصد الفعالية العلاجية. تم تكريس جهود مكثفة لتطوير طرق التشخيص الجديدة التي تكتشف وتحدد المؤشرات الحيوية بحساسية وموثوقية أعلى ، مما يساهم في تحسين تشخيص المرض والتنبؤ به. عندما يتعلق الأمر بأمراض مدمرة مثل السرطان ، فإن هذه الأساليب الجديدة القوية تسمح بتحديد مراحل المرض وكذلك اكتشاف السرطان في مراحل مبكرة جدًا. على مدى العقد الماضي ، كان هناك بعض التقدم في تطوير منصات للكشف عن المؤشرات الحيوية للأمراض. تحول التركيز الرئيسي مؤخرًا إلى تطوير اختبارات تشخيصية بسيطة وموثوقة وغير مكلفة ودقيقة ويمكنها متابعة تطور المرض لدى المريض والاستجابة للعلاج. تم التأكيد أيضًا على النهج الفردي في اكتشاف العلامات الحيوية من خلال الكشف عن المؤشرات الحيوية المتعددة في سوائل الجسم مثل الدم والبول. تتناول مقالة المراجعة هذه التطورات في نثر رامان المحسّن السطحي (SERS) والتقنيات ذات الصلة مع التركيز الأساسي على المقايسات المناعية. تتم مناقشة قيود ومزايا منصة المقايسة المناعية القائمة على SERS. تصف المقالة بدقة جميع مكونات المقايسة المناعية SERS وتسلط الضوء على القدرات الفائقة لاستراتيجية قراءة SERS مثل الحساسية العالية والاكتشاف المتزامن للعديد من المؤشرات الحيوية. أخيرًا ، يقدم استراتيجيات تم تطويرها مؤخرًا للكشف عن العلامات الحيوية في الجسم الحي باستخدام SERS.

الكلمات الدالة: المؤشرات الحيوية لتشتت رامان المحسّن سطحيًا والمقايسة النانوية للتشخيص النانوي.

بيان تضارب المصالح

الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح.

الأرقام

تمثيل تخطيطي لاكتشاف المقايسة المناعية ...

تمثيل تخطيطي لمنصة الكشف المناعي. ( أ ) ركيزة الالتقاط هي ...

المقايسة المناعية من نوع ساندويتش مع الركيزة SERS ...

المقايسة المناعية من نوع الساندويتش مع الركيزة SERS المحضرة من AuNPs المثبتة على الشريحة الزجاجية ...

المقايسة المناعية للساندويتش المستندة إلى SERS. ( أ…

المقايسة المناعية للساندويتش المستندة إلى SERS. ( أ ) تم التقاط الركيزة باستخدام طبقة رقيقة ناعمة ...

ذروة اعتماد LSPR على الشكل ...

اعتماد ذروة LSPR على شكل وتكوين العلامات plasmonic. ( أ )…

حماية المقايسة المناعية القائمة على SERS. (...

حماية المقايسة المناعية القائمة على SERS. ( أ ) اعتماد الوقت على شدة الإشارة ...

إثبات مبدأ تعدد الإرسال بثلاثة ...

إثبات مبدأ تعدد الإرسال بثلاثة جزيئات رامان ريبورتر متميزة. أطياف رامان الفردية متراكبة ...

اللوحة اليمنى: تمثيل تخطيطي لـ ...

اللوحة اليمنى: تمثيل تخطيطي لعلامات SERS المختلفة ، وتتألف من علامة واحدة واثنين و ...


المقايسات المناعية

N. Alice Lee، Ivan R. Kennedy، in Food Toxicants Analysis، 2007

1 نظرة عامة على المقايسات المناعية

قدم التحقيق في استضداد الجزيئات الصغيرة من قبل Landsteiner في عام 1917 إطارًا لتطوير المقايسات المناعية للكشف عن المركبات ذات الوزن الجزيئي المنخفض. وجد لاندشتاينر أن خصوصية البروتين الحامل الأصلي قد تغيرت من قبل المجموعات التي تم إدخالها حديثًا ، والتي لم تكن في حد ذاتها مولدة للمناعة [1]. كان اكتشافه الرئيسي مرتبطًا بالخصوصية الرائعة لمضادات الأمصال ، التي أظهرتها دراساته الكلاسيكية مع L-, د- وحمض الطرطريك المتوسط ​​، و م- أمينوبنزوات [1-3]. تم تطوير اختبارات الربط التنافسية الأولى باستخدام الروابط ذات العلامات الإشعاعية بواسطة Berson و Yallow في عام 1959 [4]. منذ ذلك الحين ، تم تطبيق المقايسات المناعية على مجموعة واسعة من التخصصات العلمية بما في ذلك علم الغدد الصماء ، والكيمياء الطبية الحيوية والسريرية ، والتي تم تسهيلها من خلال تبسيط صيغ الاختبار ، وتوافر الأجهزة الإلكترونية وتطوير التكنولوجيا أحادية النسيلة بواسطة كولر وميلشتاين في عام 1975 [5] . بدأ تطبيقه في الكيمياء التحليلية ، لا سيما في تحليل ملوثات الطعام ، في العقود الثلاثة الماضية فقط ، وأصبح يُعرف بهذه الطريقة بشكل متزايد كأداة تحليلية قوية.

1.1 مزايا المقايسات المناعية

تقدم المقايسات المناعية عددًا من المزايا في تحليل ملوثات الطعام مقارنة بالطرق التقليدية ، مثل HPLC و GC. يمكن أن توفر المقايسات المناعية طريقة اكتشاف سريعة وبسيطة وفعالة من حيث التكلفة ، مع حساسية وخصوصية قابلة للمقارنة أو أفضل (في بعض الحالات) من الطرق التقليدية. الأهم من ذلك ، أن التحليل في الموقع ممكن مع المقايسات المناعية [6]. جعلت سهولة الأتمتة والتنوع في تطبيقات المقايسة المناعية هذه الطريقة أكثر شيوعًا في السنوات الأخيرة.

إحدى المزايا الرئيسية للمقايسة المناعية هي سرعة التحليل. في الطرق الآلية ، قد تكون هناك حاجة لتنظيف العينة على نطاق واسع لإزالة التداخلات ويمكن أن يكون هذا غالبًا هو المعدل الذي يحدد الخطوة في تحليل البقايا. يحد إعداد العينة الشاق المطلوب للتحليل الآلي من تطبيقاته في الظروف التي تتطلب عددًا كبيرًا من التحليلات ، على الرغم من أن الوقت الفعلي لكل تحليل فردي على الأداة قد يكون قصيرًا نسبيًا. تتمتع المقايسات المناعية بقدرة إنتاجية عالية ويمكن تحليل العديد من العينات في وقت واحد ، مما يقلل بشكل كبير من متوسط ​​الوقت التحليلي. على سبيل المثال ، يتم إعطاء مقارنة بين الأساليب الآلية والمقايسات المناعية للأفلاتوكسينات في الجدول 1.

الجدول 1 . مقارنة بين تقنيات مختلفة لتحليل ملوثات الطعام

السموم الفطريةعمود صغيرTLCHPLCIACإليسا
حد الكشف (نانوغرام / ز)55& أمبير 1طريقة تعتمد1-5
تنظيف لكل عينة (دقيقة)60-12060-12060-12010-3010-30
كشف لكل عينة (دقيقة)30120-36012015-3010
القياس الكمي لكل عينة (دقيقة)1-510305-301-5
الوقت الإجمالي (دقيقة)151 - 15549027045 – 9015 - 50

TLC = كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة

HPLC = تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء

IAC = كروماتوغرافيا الانجذاب المناعي

ELISA = الفحص المناعي المرتبط بالإنزيم

تشمل التكاليف الرئيسية التي ينطوي عليها تحليل ملوثات الطعام بالطرق الآلية الكواشف الكيميائية والمذيبات وعمالة الكوادر الفنية والتكلفة الرأسمالية للأدوات. نتيجة لذلك ، مع محدودية التمويل والبنية التحتية ، من المرجح أن تكون المقايسات المناعية ، إذا كانت متاحة ، أكثر فعالية من حيث التكلفة. التكلفة الرأسمالية لإنشاء مختبر للمقايسة المناعية أقل بكثير من ذلك بكثير ، وبالتالي فإن التكلفة الرئيسية في المقايسة المناعية هي إلى حد كبير وقت المحلل. غالبًا ما تكون التكلفة المقدرة لكل عينة أقل بعشر مرات مع المقايسات المناعية مقارنة بالتحليلات الآلية. ومن ثم يمكن تحليل المزيد من العينات باستخدام المقايسات المناعية ، ويمكن أن يكون هذا عاملاً ضروريًا للحصول على نتائج موثوقة.

غالبًا ما تكون حساسية المقايسة المناعية جيدة مثل أو أفضل من تلك الخاصة بالطرق الآلية. تتطلب المقايسة المناعية تركيزًا أقل من التحليلات في المصفوفات الصلبة مثل الأطعمة ، بينما يتم تحليل عينات المياه عمومًا دون أي تركيز مسبق. تم تطوير المقايسات المناعية الحساسة لمبيدات الآفات والسموم الفطرية التي تحتاج إلى اشتقاق لتحليلها بطريقة فعالة والقضاء بشكل فعال على خطوة الاشتقاق. بعض الأمثلة على المقايسات المناعية لمبيدات الآفات هي 2،4-D [7-9] وديورون [10-12] وبيرميثرين [13 ، 14]. ومن الأمثلة على السموم الفطرية الأفلاتوكسينات [15 ، 16] والفومونيزينات [17].

قد تكون المقايسات المناعية المطورة لملوثات الطعام إما خاصة بمركب أو مجموعة محددة ، أو خاصة بتكوين كيميائي معين. في حين أن فحص فئة من المركبات ممكن من خلال اختبار مناعي خاص بالمجموعة ذي خصوصية واسعة موجهة إلى جزء كيميائي مشترك ، فإن قدرة الجسم المضاد على الارتباط على وجه التحديد بالمركب تمكن من استخدام المقايسة المناعية للتحليل الكمي لتحليل معين. بل إنه من الممكن تطوير مقايسة مناعية خاصة بأيزومر فراغي واحد ، مما يسمح باكتشاف الأيزومر النشط المبيد للحشرات فقط. إن المقايسات المناعية المطورة لـ S-bioallethrin [18 ، 19] ، bioresmethrin [20] و deltamethrin [21] هي أمثلة على هذه الخصوصية الفراغية العالية. من الممكن أيضًا وجود جسم مضاد خاص بمتجانِس واحد ، ومن الأمثلة الجيدة الأفلاتوكسين ب1 [16] و ochratoxin أ [22].

أصبح التحليل في الموقع للملوثات المحتملة أكثر أهمية في الصناعات الزراعية والغذائية في السنوات الأخيرة. على سبيل المثال ، فقد لوحظ فقدان مبيدات الآفات إما عن طريق التطاير أو التحلل أثناء التخزين والنقل إلى المختبر التحليلي [23]. يعد اختبار المخلفات البيطرية في المسالخ أو فصل المنتجات الملوثة بالسموم الفطرية في خلجان الاستقبال [24] جزءًا لا يتجزأ من إدارة التلوث. تم تطوير مقايسات مناعية ميدانية بسيطة سهلة الاستخدام وتم تسويق بعضها تجاريًا لملوثات الطعام. ومن الأمثلة على هذه الأترازين [25] ، 2،4-D [26] ، السيكلودين [27] ، الأفلاتوكسين ب 1 [28 ، 29] والفومونيزينات [30]. إن التبني الواسع النطاق لتقنية الكروماتوغرافيا المناعية في تحليل الملوثات هو نتيجة للطلبات المتزايدة لأدوات دعم القرار السريع التي تنطوي على الحد الأدنى من تحضير العينات. من الواضح أن الاختبارات السريعة المعتمدة على الأجسام المضادة مثل هذه أو الأشكال المعدلة ستكون ذات فائدة كبيرة للمزارعين والاستشاريين والمنظمين في اتخاذ قراراتهم لإدارة الملوثات.

1.2 عيوب المقايسات المناعية

على الرغم من أن المقايسة المناعية توفر العديد من المزايا كما تمت مناقشتها أعلاه ، إلا أنها محدودة أيضًا بعدد من أوجه القصور. وهذه هي:

وقت التطوير المطول اللازم لإعداد موانع مناعية لتحليلات جديدة

عدم الملاءمة للتحليل متعدد الجرائد لأن المقايسات المناعية عادة ما تكون قادرة فقط على اكتشاف حوالي اثنين إلى خمسة مركبات ذات صلة

الكمية المحدودة من المعلومات المسلمة في المقايسات

عدد قليل جدًا من المقايسات المناعية لها وضع رسمي

يمكن عادة تطوير طريقة تحليلية جديدة تعتمد على GC أو HPLC والتحقق من صحتها في عدة أسابيع. ومع ذلك ، فإن الوقت المستغرق لتطوير اختبار مناعي معتمد يتراوح من عدة أشهر إلى أكثر من عام. الإجراءات المتضمنة في تطوير المقايسة المناعية أكثر تعقيدًا من طرق GC أو HPLC. يمكن أن تكون التكلفة التي ينطوي عليها هذا التطوير باهظة الثمن أيضًا مقارنة بتطوير طرق GC أو HPLC حيث تتوفر المعدات بالفعل. وبالتالي ، فإن الأمر يتطلب دراسة متأنية قبل الشروع في تطوير المقايسة المناعية.

لا يحمل تحليل المردود المتعدد في المقايسات المناعية نفس المعنى الخاص بالطرق الآلية. عادة ما تكون قادرة على اكتشاف مركبين إلى خمسة مركبات لهما تراكيب متشابهة من نفس فئة مبيدات الآفات ، ولكنها لا تكتشف المركبات المختلفة بنيوياً - على سبيل المثال ، المقايسات المناعية المطورة للمبيدات الحشرية العضوية الكلورية لا تكتشف المبيدات الحشرية الفوسفاتية العضوية [27]. تعتمد أساليب GC أو HPLC على استجابة الأداة لإنتاج إشارة تحليلية كقمة في وقت استبقاء معين ، مما يسمح بالتحليل الكمي لكل مركب. على النقيض من ذلك ، لا يوفر نظام الكشف للمقايسة المناعية دائمًا تحليلًا كميًا ، باستثناء الحالات التي يكون فيها اكتشاف كل مركب في مجموعة متساوية الحساسية ، وهي حالة نادرة جدًا. على سبيل المثال ، تعتبر المقايسات المناعية للمبيدات الحشرية التي تحتوي على السيكلودين [27] ومبيدات أعشاب السلفونيل يوريا [31] والمضادات الحيوية السلفوناميد [32] مفيدة فقط كأدوات فحص نظرًا لتفاوت تقاربها مع المركبات الفردية. قد يكون من الصعب أيضًا اكتشاف مركب واحد مهم من مجموعة ملوثات غير معروفة ويمكن أن يؤدي وجود مركبات ذات بنية مماثلة في العينة إلى عدد كبير من الإيجابيات الخاطئة. ومع ذلك ، مع معلومات إضافية مثل معرفة المركبات التي تم تطبيقها مؤخرًا ، يمكن عادةً الحصول على استنتاجات مفيدة من البيانات.

فقط عدد قليل من طرق المقايسة المناعية لها وضع رسمي في الوقت الحاضر وهذه هي في الغالب السموم الفطرية ELISAs. نظرًا لأن المقايسات المناعية تعتمد على استخدام الكواشف البيولوجية مثل الأجسام المضادة وتقارن الإنزيم ، غالبًا ما يتم وصف ELISA كطريقة بيولوجية من قبل العديد من المحللين الذين اعتادوا على الطرق الكيميائية. بالإضافة إلى ذلك ، أدى الافتقار إلى التحقق من صحة المقايسات المناعية مع البيانات من العينات المتكبدة والملوثة بشكل طبيعي إلى إبطاء انتشارها المحتمل في العديد من المختبرات ، على الرغم من أن المقايسات المناعية لمعظم ملوثات الطعام الرئيسية قد تم تطويرها الآن (الجدول 2) وتطبيقها بسهولة في العديد من المختبرات. مواقف.

الجدول 2 . تم تطوير ELISA لمبيدات الآفات والسموم الفطرية والأدوية البيطرية.


اختبار مناعي بتلألؤ كيميائي للكشف السريع عن الأجسام المضادة E2 لفيروس حمى الخنازير الكلاسيكية في عينات مصل الخنازير

مختبر الدولة الرئيسي للبيولوجيا المسببة البيطرية ، المختبر المرجعي الوطني لمرض الحمى القلاعية ، معهد لانتشو للبحوث البيطرية ، الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية ، لانتشو ، جانسو ، الصين

مختبر الدولة الرئيسي للبيولوجيا المسببة البيطرية ، المختبر المرجعي الوطني لمرض الحمى القلاعية ، معهد لانتشو للبحوث البيطرية ، الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية ، لانتشو ، جانسو ، الصين

مختبر الدولة الرئيسي للبيولوجيا المسببة البيطرية ، المختبر المرجعي الوطني لمرض الحمى القلاعية ، معهد لانتشو للبحوث البيطرية ، الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية ، لانتشو ، جانسو ، الصين

مختبر الدولة الرئيسي للبيولوجيا المسببة البيطرية ، المختبر المرجعي الوطني لمرض الحمى القلاعية ، معهد لانتشو للبحوث البيطرية ، الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية ، لانتشو ، جانسو ، الصين

مختبر الدولة الرئيسي للبيولوجيا المسببة البيطرية ، المختبر المرجعي الوطني لمرض الحمى القلاعية ، معهد لانتشو للبحوث البيطرية ، الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية ، لانتشو ، جانسو ، الصين

مركز جيانغسو للابتكار المشترك للوقاية من الأمراض الحيوانية المعدية والأمراض الحيوانية المصدر ومكافحتها ، يانغتشو ، جيانغسو ، الصين

Li Pan و Yongguang Zhang ، مختبر الدولة الرئيسي لبيولوجيا المسببات البيطرية ، المختبر المرجعي الوطني لمرض الحمى القلاعية ، معهد لانتشو للبحوث البيطرية ، الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية ، لانتشو ، قانسو ، الصين.

مختبر الدولة الرئيسي للبيولوجيا المسببة البيطرية ، المختبر المرجعي الوطني لمرض الحمى القلاعية ، معهد لانتشو للبحوث البيطرية ، الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية ، لانتشو ، جانسو ، الصين

مركز الابتكار المشترك في جيانغسو للوقاية من الأمراض الحيوانية المعدية والأمراض الحيوانية المصدر ومكافحتها ، يانغتشو ، جيانغسو ، الصين

Li Pan و Yongguang Zhang ، مختبر الدولة الرئيسي لبيولوجيا المسببات البيطرية ، المختبر المرجعي الوطني لمرض الحمى القلاعية ، معهد لانتشو للبحوث البيطرية ، الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية ، لانتشو ، قانسو ، الصين.

مختبر الدولة الرئيسي للبيولوجيا المسببة البيطرية ، المختبر المرجعي الوطني لمرض الحمى القلاعية ، معهد لانتشو للبحوث البيطرية ، الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية ، لانتشو ، جانسو ، الصين

مختبر الدولة الرئيسي للبيولوجيا المسببة البيطرية ، المختبر المرجعي الوطني لمرض الحمى القلاعية ، معهد لانتشو للبحوث البيطرية ، الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية ، لانتشو ، جانسو ، الصين

مختبر الدولة الرئيسي للبيولوجيا المسببة البيطرية ، المختبر المرجعي الوطني لمرض الحمى القلاعية ، معهد لانتشو للبحوث البيطرية ، الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية ، لانتشو ، جانسو ، الصين

مختبر الدولة الرئيسي للبيولوجيا المسببة البيطرية ، المختبر المرجعي الوطني لمرض الحمى القلاعية ، معهد لانتشو للبحوث البيطرية ، الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية ، لانتشو ، جانسو ، الصين

مختبر الدولة الرئيسي للبيولوجيا المسببة البيطرية ، المختبر المرجعي الوطني لمرض الحمى القلاعية ، معهد لانتشو للبحوث البيطرية ، الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية ، لانتشو ، جانسو ، الصين

مركز جيانغسو للابتكار المشترك للوقاية من الأمراض الحيوانية المعدية والأمراض الحيوانية المصدر ومكافحتها ، يانغتشو ، جيانغسو ، الصين

Li Pan و Yongguang Zhang ، مختبر الدولة الرئيسي لبيولوجيا المسببات البيطرية ، المختبر المرجعي الوطني لمرض الحمى القلاعية ، معهد لانتشو للبحوث البيطرية ، الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية ، لانتشو ، قانسو ، الصين.

مختبر الدولة الرئيسي للبيولوجيا المسببة البيطرية ، المختبر المرجعي الوطني لمرض الحمى القلاعية ، معهد لانتشو للبحوث البيطرية ، الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية ، لانتشو ، جانسو ، الصين

مركز الابتكار المشترك في جيانغسو للوقاية من الأمراض الحيوانية المعدية والأمراض الحيوانية المصدر ومكافحتها ، يانغتشو ، جيانغسو ، الصين

Li Pan و Yongguang Zhang ، مختبر الدولة الرئيسي لبيولوجيا المسببات البيطرية ، المختبر المرجعي الوطني لمرض الحمى القلاعية ، معهد لانتشو للبحوث البيطرية ، الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية ، لانتشو ، قانسو ، الصين.

الملخص

تم التعرف تدريجياً على الأداء العالي للمقايسات المناعية اللمعان الكيميائي (CLIAs) في التشخيص في السنوات الأخيرة ، ولكن لم يتم الإبلاغ عن تطبيقها في تشخيص حمى الخنازير الكلاسيكية (CSF). هنا ، تم استخدام بروتين مؤتلف E2 (rE2) وجسم مضاد أحادي النسيلة مترافق مع البيروكسيديز (MAb G5) لتطوير اختبار مناعي للتلألؤ الكيميائي قائم على المنافسة (cCLIA) للكشف السريع والدقيق عن الأجسام المضادة الخاصة بـ E2 في مصل الخنازير. لتقييم جدوى cCLIA في تشخيص CSF ، قمنا بتطوير مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (cELISA) على أساس المنافسة كعنصر تحكم. في ظل ظروف الاختبار المثلى ، أظهر cCLIA نسبة إشارة إلى ضوضاء أعلى من تلك الخاصة بالتحكم cELISA. كانت أفضل نسب الإشارة إلى الضوضاء لـ cCLIA و cELISA هي 70 و 17 ، على التوالي. بعد ذلك ، تمت مقارنة الأداء التشخيصي للمقايسين من خلال فحص لوحة من عينات مصل الخنازير (ن = 285) بحالة مؤكدة ، وأظهر cCLIA حساسية تشخيصية أعلى (Dn) وقيم خصوصية تشخيصية (Dp) من تلك الخاصة بـ cELISA. كانت Dn و Dp لـ cCLIA 97.49٪ و 96.08٪ على التوالي ، وكانت تلك الخاصة بـ cELISA 93.97٪ و 94.12٪ على التوالي. علاوة على ذلك ، يمكن أن توفر cCLIA نتائج في غضون 20 دقيقة ، في حين تتطلب cELISA التحكم 1 ساعة على الأقل. وفقًا لهذه النتائج ، فإن cCLIA المطورة حديثًا لها تطبيقات محتملة في تشخيص CSF وتوفر نهجًا بديلاً للكشف الفعال والسريع عن الأجسام المضادة الخاصة بـ E2.


محتويات

كمقايسة تحليلية للكيمياء الحيوية وتقنية "معمل مبلل" ، تتضمن ELISA الكشف عن مادة تحليلية (أي المادة المحددة التي يتم تحليل وجودها كميًا أو نوعيًا) في عينة سائلة بطريقة تستمر في استخدام الكواشف السائلة أثناء التحليل (على سبيل المثال ، التسلسل المتحكم فيه للتفاعلات البيوكيميائية التي ستولد إشارة يمكن قياسها كمياً بسهولة وتفسيرها كمقياس لكمية المادة التحليلية في العينة) التي تظل سائلة وتبقى داخل غرفة التفاعل أو ضرورية للاحتفاظ بالمواد المتفاعلة محتواة. [2] [3] هذا على عكس تقنيات "المعمل الجاف" التي تستخدم الشرائط الجافة. حتى إذا كانت العينة سائلة (على سبيل المثال ، قطرة صغيرة مُقاسة) ، فإن خطوة الكشف النهائية في التحليل "الجاف" تتضمن قراءة شريط جاف بواسطة طرق مثل قياس الانعكاس ولا تحتاج إلى غرفة احتواء تفاعل لمنع الانسكاب أو الاختلاط بين العينات . [4]

كمقايسة غير متجانسة ، تفصل ELISA بعض مكونات خليط التفاعل التحليلي عن طريق امتصاص مكونات معينة على الطور الصلب الذي يتم تجميده ماديًا. في ELISA ، تُضاف عينة سائلة إلى طور صلب ثابت بخصائص ارتباط خاصة ويتبعها كواشف سائلة متعددة يتم إضافتها بشكل متسلسل واحتضانها وغسلها ، متبوعة ببعض التغيير البصري (على سبيل المثال ، تطوير اللون بواسطة منتج إنزيمي التفاعل) في السائل النهائي في البئر الذي تُقاس منه كمية المادة التحليلية. تعتمد "القراءة" الكمية عادةً على الكشف عن شدة الضوء المرسل عن طريق القياس الطيفي ، والذي يتضمن التقدير الكمي لنقل بعض الأطوال الموجية المحددة للضوء عبر السائل (بالإضافة إلى قاع البئر الشفاف في شكل لوح متعدد الآبار) . [2] [3] تعتمد حساسية الكشف على تضخيم الإشارة أثناء التفاعلات التحليلية. نظرًا لأن تفاعلات الإنزيم هي عمليات تضخيم معروفة جيدًا ، يتم إنشاء الإشارة بواسطة إنزيمات مرتبطة بكواشف الكشف بنسب ثابتة للسماح بتقدير دقيق ، وبالتالي اسم "مرتبط بالإنزيم". [5]

يُطلق على التحليل أيضًا اسم ligand لأنه سيرتبط أو يرتبط على وجه التحديد بكاشف الكشف ، وبالتالي تقع ELISA ضمن الفئة الأكبر من فحوصات ربط ligand. [2] كاشف الربط الخاص بالرابط "مثبت" ، أي عادة ما يتم تغطيته وتجفيفه على قاع شفاف وأحيانًا أيضًا جدار جانبي للبئر [6] ("الطور الصلب" الثابت / "الركيزة الصلبة" هنا على عكس إلى الجسيمات الدقيقة الصلبة / الحبيبات التي يمكن غسلها بعيدًا) ، والتي يتم إنشاؤها عادةً كلوحة متعددة الآبار تُعرف باسم "لوحة ELISA". تقليديًا ، مثل الأشكال الأخرى من المقايسات المناعية ، يتم استخدام خصوصية تفاعل نوع الجسم المضاد - المستضد لأنه من السهل رفع الجسم المضاد تحديدًا ضد مولد الضد بكميات كبيرة ككاشف. بدلاً من ذلك ، إذا كان التحليل نفسه عبارة عن جسم مضاد ، فيمكن استخدام مستضده المستهدف ككاشف ارتباط. [7]

قبل تطوير ELISA ، كان الخيار الوحيد لإجراء المقايسة المناعية هو المقايسة المناعية الإشعاعية ، وهي تقنية تستخدم مستضدات أو أجسام مضادة ذات علامات إشعاعية. في المقايسة المناعية الإشعاعية ، يوفر النشاط الإشعاعي الإشارة التي تشير إلى وجود مستضد معين أو جسم مضاد في العينة. تم وصف المقايسة المناعية الراديوية لأول مرة في ورقة علمية بقلم روزالين سوسمان يالو وسولومون بيرسون نُشرت عام 1960. [8]

نظرًا لأن النشاط الإشعاعي يشكل تهديدًا محتملاً للصحة ، فقد تم البحث عن بديل أكثر أمانًا. بديل مناسب للمقايسة المناعية الإشعاعية من شأنه أن يحل محل إشارة غير مشعة بدلاً من الإشارة المشعة. عندما تتفاعل الإنزيمات (مثل بيروكسيداز الفجل) مع ركائز مناسبة (مثل ABTS أو TMB) ، يحدث تغيير في اللون ، والذي يستخدم كإشارة. ومع ذلك ، يجب أن ترتبط الإشارة بوجود جسم مضاد أو مستضد ، ولهذا السبب يجب ربط الإنزيم بجسم مضاد مناسب. تم تطوير عملية الربط هذه بشكل مستقل بواسطة Stratis Avrameas و G.B Pierce. [9] نظرًا لأنه من الضروري إزالة أي جسم مضاد أو مستضد غير منضم عن طريق الغسل ، يجب تثبيت الجسم المضاد أو مولد الضد على سطح الحاوية ، أي يجب تحضير مادة الامتصاص المناعي. تم نشر تقنية لإنجاز هذا من قبل وايد وجيركر بوراث في عام 1966. [10]

في عام 1971 ، نشر كل من Peter Perlmann و Eva Engvall من جامعة ستوكهولم في السويد ، و Anton Schuurs و Bauke van Weemen في هولندا بشكل مستقل أوراقًا جمعت هذه المعرفة في طرق لأداء EIA / ELISA. [11] [12]

عادةً ما تتضمن ELISA التقليدية مراسلين وركائز كروموجينية تنتج نوعًا من تغيير اللون الملحوظ للإشارة إلى وجود مستضد أو مادة تحليلية. تستخدم التقنيات الحديثة المشابهة لـ ELISA مراسلي تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) الفلوروجيني ، والتوهج الكهربائي ، والمعارض الكمي لإنشاء إشارات قابلة للقياس الكمي. يمكن أن يتمتع هؤلاء المراسلين الجدد بمزايا مختلفة ، بما في ذلك الحساسية العالية وتعدد الإرسال. [13] [14] من الناحية الفنية ، فإن المقايسات الأحدث من هذا النوع ليست ELISA بشكل صارم ، لأنها ليست "مرتبطة بالإنزيم" ، ولكنها مرتبطة بدلاً من ذلك ببعض المراسلين غير الإنزيمات. ومع ذلك ، نظرًا لأن المبادئ العامة في هذه الاختبارات متشابهة إلى حد كبير ، فإنها غالبًا ما يتم تجميعها في نفس فئة ELISAs.

في عام 2012 ، كان اختبار ELISA عالي الحساسية والقائم على الإنزيم باستخدام الجسيمات النانوية كمراسل chromogenic قادرًا على إعطاء إشارة لونية بالعين المجردة ، من اكتشاف أتوجرامات فقط من التحليلة. يظهر اللون الأزرق للنتائج الإيجابية واللون الأحمر للسلبية. لاحظ أن هذا الاكتشاف يمكن فقط تأكيد وجود أو عدم وجود المادة التحليلية ، وليس التركيز الفعلي. [15]

هناك العديد من اختبارات ELISA لجزيئات معينة تستخدم الأجسام المضادة المطابقة. يتم تقسيم اختبارات ELISA إلى عدة أنواع من الاختبارات بناءً على كيفية ارتباط التحليلات والأجسام المضادة واستخدامها. [16] [17] الأنواع الرئيسية موصوفة هنا. [18]

تحرير ELISA المباشر

تتبع خطوات ELISA المباشر [19] الآلية التالية:

  • يضاف محلول مخزّن من المستضد المراد اختباره إلى كل بئر (عادةً 96 طبقًا جيدًا) من صفيحة ميكروترية ، حيث يُمنح وقتًا للالتصاق بالبلاستيك من خلال تفاعلات الشحن.
  • يضاف محلول من البروتين غير المتفاعل ، مثل ألبومين المصل البقري أو الكازين ، إلى كل بئر من أجل تغطية أي سطح بلاستيكي في البئر يظل غير مطلي بواسطة المستضد.
  • يضاف الجسم المضاد الأولي مع إنزيم متصل (مترافق) ، والذي يرتبط على وجه التحديد بطبقة مستضد اختبار البئر.
  • ثم يتم إضافة ركيزة لهذا الإنزيم. غالبًا ما يتغير لون هذه الركيزة عند التفاعل مع الإنزيم.
  • كلما زاد تركيز الجسم المضاد الأساسي الموجود في المصل ، كلما كان تغير اللون أقوى. في كثير من الأحيان ، يستخدم مقياس الطيف لإعطاء قيم كمية لقوة اللون.

يعمل الإنزيم كمضخم حتى لو بقي عدد قليل فقط من الأجسام المضادة المرتبطة بالإنزيم مرتبطًا ، فإن جزيئات الإنزيم ستنتج العديد من جزيئات الإشارة. ضمن حدود الفطرة السليمة ، يمكن أن يستمر الإنزيم في إنتاج اللون إلى أجل غير مسمى ، ولكن كلما زاد ارتباط الجسم المضاد ، كلما تطور اللون بشكل أسرع. العيب الرئيسي لـ ELISA المباشر هو أن طريقة تجميد المستضد ليست محددة عند استخدام المصل كمصدر لاختبار المستضد ، قد تلتصق جميع البروتينات في العينة بلوحة microtiter جيدًا ، لذلك يجب أن تتنافس التراكيز الصغيرة من التحليل في المصل مع بروتينات المصل الأخرى عند الارتباط بسطح البئر. يوفر الساندويتش أو ELISA غير المباشر حلاً لهذه المشكلة ، باستخدام جسم مضاد "التقاط" خاص بمولد الضد للاختبار لسحبه من الخليط الجزيئي للمصل. [ بحاجة لمصدر ]

يمكن تشغيل ELISA بتنسيق نوعي أو كمي. النتائج النوعية تعطي نتيجة إيجابية أو سلبية بسيطة (نعم أو لا) لعينة. يتم تحديد الفاصل بين الموجب والسالب من قبل المحلل وقد يكون إحصائيًا. غالبًا ما يستخدم مرتين أو ثلاث مرات الانحراف المعياري (خطأ متأصل في الاختبار) للتمييز بين العينات الإيجابية والسلبية. في ELISA الكمي ، تتم مقارنة الكثافة البصرية (OD) للعينة بمنحنى قياسي ، وهو عادةً تخفيف تسلسلي لمحلول تركيز معروف للجزيء المستهدف. على سبيل المثال ، إذا قامت عينة الاختبار بإرجاع OD بقيمة 1.0 ، فإن النقطة الموجودة على المنحنى القياسي والتي أعطت OD = 1.0 يجب أن تكون بنفس تركيز المادة التحليلية مثل العينة. [ بحاجة لمصدر ]

يختلف استخدام ومعنى الأسماء "ELISA غير المباشر" و "ELISA المباشر" في الأدبيات وعلى مواقع الويب اعتمادًا على سياق التجربة. عندما يتم تحليل وجود مستضد ، يشير الاسم "ELISA المباشر" إلى ELISA حيث يتم استخدام الجسم المضاد الأولي المسمى فقط ، ويشير المصطلح "ELISA غير المباشر" إلى ELISA حيث يرتبط المستضد بالجسم المضاد الأولي والتي يتم الكشف عنها بعد ذلك بواسطة جسم مضاد ثانوي. في الحالة الأخيرة ، تتميز شطيرة ELISA بوضوح عن ELISA غير المباشر. عندما يكون الجسم المضاد "الأساسي" مهمًا ، على سبيل المثال في حالة تحليلات التمنيع ، يتم الكشف عن هذا الجسم المضاد مباشرة بواسطة الجسم المضاد الثانوي وينطبق المصطلح "ELISA غير المباشر" على الإعداد مع اثنين من الأجسام المضادة. [ بحاجة لمصدر ]

ساندويتش إليسا تحرير

يتم استخدام ELISA "ساندويتش" للكشف عن عينة مستضد. [20] الخطوات هي:

  1. يتم تحضير السطح الذي ترتبط به كمية معروفة من الجسم المضاد الملتصق.
  2. يتم حظر أي مواقع ربط غير محددة على السطح.
  3. يتم تطبيق العينة المحتوية على مستضد على اللوحة ، ويتم التقاطها بواسطة الجسم المضاد.
  4. يتم غسل اللوحة لإزالة مستضد غير منضم.
  5. يتم إضافة جسم مضاد محدد ، ويرتبط بالمستضد (ومن هنا تأتي "الشطيرة": يكون المستضد عالقًا بين جسمين مضادين). يمكن أن يكون هذا الجسم المضاد الأولي أيضًا في مصل المتبرع ليتم اختباره من أجل التفاعل تجاه المستضد.
  6. يتم تطبيق الأجسام المضادة الثانوية المرتبطة بالإنزيم كأجسام مضادة للكشف والتي ترتبط أيضًا بشكل خاص بمنطقة Fc للجسم المضاد (غير محددة).
  7. يتم غسل اللوحة لإزالة اتحادات إنزيم الأجسام المضادة غير المنضمة.
  8. تتم إضافة مادة كيميائية ليتم تحويلها بواسطة الإنزيم إلى إشارة ملونة أو فلورية أو كهروكيميائية.
  9. يتم قياس الامتصاص أو التألق أو الإشارة الكهروكيميائية (على سبيل المثال ، التيار) لآبار اللوحة لتحديد وجود وكمية المستضد.

تتضمن الصورة الموجودة على اليمين استخدام جسم مضاد ثانوي مترافق مع إنزيم ، على الرغم من أنه ، بالمعنى التقني ، هذا ليس ضروريًا إذا كان الجسم المضاد الأولي مترافقًا مع إنزيم (والذي سيكون ELISA مباشرًا). ومع ذلك ، فإن استخدام اتحاد الأجسام المضادة الثانوية يتجنب العملية المكلفة لإنشاء أجسام مضادة مرتبطة بالإنزيم لكل مستضد قد يرغب المرء في اكتشافه. باستخدام الجسم المضاد المرتبط بالإنزيم الذي يربط منطقة Fc بالأجسام المضادة الأخرى ، يمكن استخدام هذا الجسم المضاد المرتبط بالإنزيم في مجموعة متنوعة من المواقف. بدون الطبقة الأولى من الجسم المضاد "الملتقط" ، يمكن لأي بروتينات في العينة (بما في ذلك بروتينات المصل) أن تمتص بشكل تنافسي على سطح اللوحة ، مما يقلل من كمية المستضد المعطل. إن استخدام الجسم المضاد المحدد المنقى لربط مولد الضد بالبلاستيك يلغي الحاجة إلى تنقية مولد الضد من الخلائط المعقدة قبل القياس ، وتبسيط الفحص ، وزيادة خصوصية وحساسية الفحص. غالبًا ما تحتاج شطيرة ELISA المستخدمة في البحث إلى التحقق من الصحة بسبب خطر حدوث نتائج إيجابية خاطئة. [21]

تحرير ELISA التنافسي

الاستخدام الثالث لـ ELISA هو من خلال الربط التنافسي. تختلف خطوات ELISA إلى حد ما عن المثالين الأولين:

يتم تحضين الجسم المضاد غير المصنف في وجود مستضده (عينة).

  1. يتم بعد ذلك إضافة معقدات الجسم المضاد / المستضد المربوطة إلى البئر المغلف بالمستضد.
  2. يتم غسل الصفيحة وإزالة الأجسام المضادة غير المقيدة. (كلما زاد عدد المستضد في العينة ، زاد تكوين معقدات Ag-Ab ، وبالتالي هناك عدد أقل من الأجسام المضادة غير المقيدة المتاحة للارتباط بالمستضد في البئر ، وبالتالي "المنافسة".)
  3. يضاف الجسم المضاد الثانوي الخاص بالجسم المضاد الأولي. يقترن هذا الجسم المضاد الثاني بالإنزيم.
  4. تتم إضافة ركيزة ، وتنتج الإنزيمات المتبقية إشارة كروموجينية أو فلورية.
  5. يتم إيقاف التفاعل لمنع التشبع النهائي للإشارة.

تشتمل بعض مجموعات ELISA التنافسية على مستضد مرتبط بالإنزيم بدلاً من الأجسام المضادة المرتبطة بالإنزيم. يتنافس المستضد المسمى على مواقع ربط الأجسام المضادة الأولية مع عينة المستضد (غير المعنونة). كلما قل المستضد في العينة ، كلما احتفظ بالمستضد المسمى في البئر وكانت الإشارة أقوى.

بشكل عام ، لا يتم وضع المستضد أولاً في البئر.

للكشف عن الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية ، يتم تغطية آبار لوحة ميكروتيتر بمستضد فيروس نقص المناعة البشرية. يتم استخدام نوعين من الأجسام المضادة ، أحدهما مترافق مع إنزيم والآخر موجود في مصل الدم (إذا كان المصل موجبًا للجسم المضاد). تحدث المنافسة التراكمية بين اثنين من الأجسام المضادة لنفس المستضد ، مما يؤدي إلى رؤية إشارة أقوى. تضاف الأمصال المراد اختبارها إلى هذه الآبار وتحضينها عند 37 درجة مئوية ، ثم تغسل. في حالة وجود الأجسام المضادة ، يحدث تفاعل الجسم المضاد. لم يتم ترك أي مستضد للأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية المحددة بالإنزيم. تظل هذه الأجسام المضادة خالية عند الإضافة ويتم غسلها أثناء الغسيل. تتم إضافة الركيزة ، ولكن لا يوجد إنزيم يعمل عليها ، لذلك لا تظهر النتيجة الإيجابية أي تغيير في اللون.

تحرير ELISA العكسي

اختبار ELISA الرابع لا يستخدم الآبار التقليدية. This test leaves the antigens suspended in the test fluid. [22] [23]

  1. Unlabeled antibody is incubated in the presence of its antigen (sample)
  2. A sufficient incubation period is provided to allow the antibodies to bind to the antigens.
  3. The sample is then passed through the Scavenger container. This can be a test tube or a specifically designed flow through channel. The surface of the Scavenger container or channel has “Scavenger Antigens” bound to it. These can be identical or sufficiently similar to the primary antigens that the free antibodies will bind.
  4. The Scavenger container must have sufficient surface area and sufficient time to allow the Scavenger Antigens to bind to all the excess Antibodies introduced into the sample.
  5. The sample, that now contains the tagged and bound antibodies, is passed through a detector. This device can be a flow cytometer or other device that illuminates the tags and registers the response. [24]

This test allows multiple antigens to be tagged and counted at the same time. This allows specific strains of bacteria to be identified by two (or more) different color tags. If both tags are present on a cell, then the cell is that specific strain. If only one is present, it is not.

This test is done, generally, one test at a time and cannot be done with the microtiter plate. The equipment needed is usually less complicated and can be used in the field.

The following table lists the enzymatic markers commonly used in ELISA assays, which allow the results of the assay to be measured upon completion.

  • OPD (ا-phenylenediamine dihydrochloride) turns amber to detect HRP (Horseradish Peroxidase), which is often used to as a conjugated protein. [25]
  • TMB (3,3',5,5'-tetramethylbenzidine) turns blue when detecting HRP and turns yellow after the addition of sulfuric or phosphoric acid. [25]
  • ABTS (2,2'-Azinobis [3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid]-diammonium salt) turns green when detecting HRP. [25]
  • PNPP (ص-Nitrophenyl Phosphate, Disodium Salt) turns yellow when detecting alkaline phosphatase. [25]

Because the ELISA can be performed to evaluate either the presence of antigen or the presence of antibody in a sample, it is a useful tool for determining serum antibody concentrations (such as with the HIV test [26] or West Nile virus). It has also found applications in the food industry in detecting potential food allergens, such as milk, peanuts, walnuts, almonds, and eggs [27] and as serological blood test for coeliac disease. [28] [29] ELISA can also be used in toxicology as a rapid presumptive screen for certain classes of drugs.

The ELISA was the first screening test widely used for HIV because of its high sensitivity. In an ELISA, a person's serum is diluted 400 times and applied to a plate to which HIV antigens are attached. If antibodies to HIV are present in the serum, they may bind to these HIV antigens. The plate is then washed to remove all other components of the serum. A specially prepared "secondary antibody"—an antibody that binds to other antibodies—is then applied to the plate, followed by another wash. This secondary antibody is chemically linked in advance to an enzyme.

Thus, the plate will contain enzyme in proportion to the amount of secondary antibody bound to the plate. A substrate for the enzyme is applied, and catalysis by the enzyme leads to a change in color or fluorescence. ELISA results are reported as a number the most controversial aspect of this test is determining the "cut-off" point between a positive and a negative result.

A cut-off point may be determined by comparing it with a known standard. If an ELISA test is used for drug screening at workplace, a cut-off concentration, 50 ng/ml, for example, is established, and a sample containing the standard concentration of analyte will be prepared. Unknowns that generate a stronger signal than the known sample are "positive." Those that generate weaker signal are "negative".

There are ELISA tests to detect various kind of diseases, such as dengue, malaria, Chagas disease [30] , Johne's disease, and others. [31] ELISA tests also are extensively employed for في المختبر diagnostics in medical laboratories. The other uses of ELISA include:


Potent mouse monoclonal antibodies that block SARS-CoV-2 infection

Coronavirus disease 2019 (COVID-19), caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2), has developed into a global pandemic since its first outbreak in the winter of 2019. An extensive investigation of SARS-CoV-2 is critical for disease control. Various recombinant monoclonal antibodies of human origin that neutralize SARS-CoV-2 infection have been isolated from convalescent patients and will be applied as therapies and prophylaxis. However, the need for dedicated monoclonal antibodies suitable for molecular pathology research is not fully addressed. Here, we produced six mouse anti-SARS-CoV-2 spike monoclonal antibodies that exhibit not only robust performance in immunoassays including western blotting, ELISA, immunofluorescence, and immunoprecipitation, but also demonstrate neutralizing activity against SARS-CoV-2 infection to VeroE6/TMPRSS2 cells. Due to their mouse origin, our monoclonal antibodies are compatible with the experimental immunoassay setups commonly used in basic molecular biology research laboratories, providing a useful tool for future research. Furthermore, in the hope of applying the antibodies of clinical setting, we determined the variable regions of the antibodies and used them to produce recombinant human/mouse chimeric antibodies.

الكلمات الدالة: SARS-CoV-2 mouse monoclonal antibody neutralizing antibody spike.

Copyright © 2021 The Authors. Published by Elsevier Inc. All rights reserved.

بيان تضارب المصالح

The authors declare that they have no conflicts of interest with the contents of this article.


Recombinase polymerase amplification-nucleic acid lateral flow immunoassays for Newcastle disease virus and infectious bronchitis virus detection

Newcastle disease virus (NDV) and infectious bronchitis virus (IBV) are two poultry pathogens affecting the respiratory tract of chickens, and cause major economic losses in the industry. Rapid detection of these viruses is crucial to inform implementation of appropriate control measures. The objective of our study is developing a simple, rapid and field applicable recombinase polymerase amplification (RPA)-nucleic acid lateral flow (NALF) immunoassay for detection of NDV and IBV. Isothermal amplification of the matrix protein (M) gene of NDV and the nucleoprotein (N) gene of IBV was implemented via recombinase polymerase amplification at 38 °C for 40 min and 20 min, respectively using modified labeled primers. NALF device used in this study utilizes antibodies for detection of labeled RPA amplicons. The results revealed that RPA-NALF immunoassays can detect both viruses after 40 min at 38 °C and only NDV after 20 min. The limit of detection (LOD) was 10 genomic copies/RPA reaction. The assays results on clinical samples collected from diseased chicken farms demonstrated a good performance in comparison with quantitative real time reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR). The assays established in this study can facilitate rapid, on-site molecular diagnosis of suspected cases of ND and IB viral infections as the results can be detected by the naked eye without the need for measuring fluorescence. Furthermore, the NALF device could be adapted to detect other infectious agents.

الكلمات الدالة: Infectious bronchitis virus Newcastle disease virus Nucleic acid lateral flow immunoassay Recombinase polymerase amplification.

بيان تضارب المصالح

The authors declare that they have no conflict of interest.

الأرقام

Schematic representation of PCRD nucleic…

Schematic representation of PCRD nucleic acid detector design. At the conjugate pad, the…

Results showing identification of RPA…

Results showing identification of RPA amplicons after incubation for period of 40 min…

Results showing identification of RPA…

Results showing identification of RPA amplicons after incubation for period of 20 min…

The limit of detection (LOD)…

The limit of detection (LOD) for both NDV ( أ ) and IBV…

Performance of RT-RPA-NALF assays on…

Performance of RT-RPA-NALF assays on clinical samples for IBV and NDV detection: أ…


شكر وتقدير

The authors would like to thank Gert Zimmer (Institute of Virology and Immunology, Mittelhäusern/Switzerland), Stefan Pöhlmann, and Markus Hoffmann (both German Primate Center, Infection Biology Unit, Goettingen/Germany) for providing the reagents required for VSV pseudotype generation. Eliseo Albert holds a Río Hortega research contract from the Carlos III Health Institute (Ref. CM18/00221). Ron Geller holds a Ramón y Cajal fellowship from the Spanish Ministry of Economy and Competitiveness (RYC-2015-17517). This study was supported by Valencian Government grant IDIFEDER/2018/056 to Jesús Rodríguez-Díaz, Generalitat Valenciana grant Covid_19-SCI to Roberto Gozalbo-Rovira, Spanish National Research Council grant CSIC-COV19-082, and Fondo Supera Covid-19 grant BlockAce to Roberto Gozalbo-Rovira.


Handbook of Immunoassay Technologies

Handbook of Immunoassay Technologies: Approaches, Performances, and Applications unravels the role of immunoassays in the biochemical sciences. During the last four decades, a wide range of immunoassays has been developed, ranging from the conventional enzyme-linked immunosorbent assays, to the smartphone-based point-of-care formats. The advances in rapid biochemical procedures, novel biosensing schemes, fully integrated lab-on-a-chip platforms, prolonged biomolecular storage strategies, device miniaturization and interfacing, and emerging smart system technologies equipped with personalized mobile healthcare tools are paving the way to next-generation immunoassays, and are all discussed in this comprehensive text.

Immunoassays play a prominent role in clinical diagnostics as they are the eyes of healthcare professionals, helping them make informed clinical decisions via confirmed disease diagnosis, and thus enabling favorable health outcomes. The faster and reliable diagnosis of infections will further control their spread to uninfected persons. Similarly, immunoassays play a prominent role in veterinary diagnostics, food analysis, environmental monitoring, defense and security, and other bioanalytical settings. Therefore, they enable the detection of a plethora of analytes, which includes disease biomarkers, pathogens, drug impurities, environmental contaminants, allergens, food adulterants, drugs of abuse and various biomolecules.

Handbook of Immunoassay Technologies: Approaches, Performances, and Applications unravels the role of immunoassays in the biochemical sciences. During the last four decades, a wide range of immunoassays has been developed, ranging from the conventional enzyme-linked immunosorbent assays, to the smartphone-based point-of-care formats. The advances in rapid biochemical procedures, novel biosensing schemes, fully integrated lab-on-a-chip platforms, prolonged biomolecular storage strategies, device miniaturization and interfacing, and emerging smart system technologies equipped with personalized mobile healthcare tools are paving the way to next-generation immunoassays, and are all discussed in this comprehensive text.

Immunoassays play a prominent role in clinical diagnostics as they are the eyes of healthcare professionals, helping them make informed clinical decisions via confirmed disease diagnosis, and thus enabling favorable health outcomes. The faster and reliable diagnosis of infections will further control their spread to uninfected persons. Similarly, immunoassays play a prominent role in veterinary diagnostics, food analysis, environmental monitoring, defense and security, and other bioanalytical settings. Therefore, they enable the detection of a plethora of analytes, which includes disease biomarkers, pathogens, drug impurities, environmental contaminants, allergens, food adulterants, drugs of abuse and various biomolecules.


شكر وتقدير

The NRL would like to thank the following people:

All the participating laboratories for their willingness to provide specimens and their open collaboration:

Dr Tim Brooks Dr Amanda Semper, Rare and Imported Pathogen Laboratory, Public Health England, Porton Down, UK

Ms Jennie Burke, Australian Biologics Testing Services, Sydney, Australia

Dr Bernie Hudson Mr Bruce Wong, NSW Health Pathology, Royal North Shore Hospital, Sydney, Australia

Australian Red Cross Blood Service, Australia

Dr Jennifer M Robson, Sullivan Nicolaides Pathology, Brisbane, Australia

Dr Armin Schwarbach, ArminLabs Augsburg, Germany

Dr Jyotsna Shah, IGeneX Inc. California, USA

NRL staff for their significant contribution in specimen handling, testing and recording the results for this study:

Dr Kate Zhang, Ms Jing Jing Cai, Ms Nilukshi Arachchi, Ms Tamara McDonald, Ms Jenny Catimel


شاهد الفيديو: الجهاز المناعي: آلية الدفاع الطبيعية في الجسم. AFP Animé (أغسطس 2022).